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TUhjnbcbe - 2021/8/5 1:04:00
目的:规范HbeAb检测的操作范围:检验科免疫实验室责任人:免疫实验室专业组长和实验室工作人员应用仪器:酶标仪检测原理:抗—HBe检测为竞争法,即将抗—HBe结合于固相载体上,然后同时加入被检血清中和试剂(含一定滴度的HbeAg),如标本中含抗—HBe,则与固相载体上抗—HBe的竞争结合HbeAg,被检标本中抗—HBe越高。竞争结合的HbeAg量越多,与固相抗—HBe结合HbeAg量越少,从而使酶标记抗体(HbeAb—HRP)与固相上的HbeAg结合的量越少,加底物显色后的颜色越浅,反之,颜色则越深。试剂品牌:速显乙型肝炎病*e抗体诊断试剂盒。标本收集:1、最好使用新鲜血清样本,如需保存,可置2-8℃冷藏48小时或-20℃冷冻4周。2、避免使用溶血、浑浊或脂血样本及反复冻融样本。试剂盒组成:1、HBeAb微孔板2、HBeAb酶标记抗体3、HBeAb阳性对照血清4、HBeAb阴性对照血清5、浓缩洗涤液6、底物A7、底物B8、终止液(2MH2SO4)9、封口膜10、自封袋操作步骤:1、加样:每孔加入待测标本50ul,设阴、阳对照各1孔,阴、阳对照各加1滴,并设定空白对照孔1孔。1、加酶:每孔加入酶结合物1滴(空白孔除外),充分混匀,封板。2、温育:混匀置37oC孵育30分钟。3、洗涤:弃去孔内液体,将稀释后的洗液每孔注入ul,每次静置5秒甩干重复洗板5次。4、显色:每孔加入底物缓冲液50ul加入底物液50ul混匀置37oC,15分钟。5、终止:每孔加入终止液1滴,混匀,用酶标仪取波长ul读取各孔OD值。结果判定:1、目测法:在白色背景下观察各孔颜色,蓝色为阴性;无色或淡蓝色为阳性。2、比色法:每孔加入终止液50ul(1滴),轻拍混匀。在单波长nm下,用空白孔校零,再读取各孔OD值。3、临界值(C.O.)计算:样品为原倍血清时,临界值(C.O.)=阴性对照平均OD值×0.2样品为非原倍血清时,临界值(C.O.)=阴性对照平均OD值×0.4结果:样品OD值<临界值(C.O.)为Anti-HBe阳性样品OD值≥临界值(C.O.)为Anti-HBe阴性注意事项:1、冷藏环境中取出的试剂盒应平衡至室温后方可使用。2、使用的预包被板条应置于封口袋,2~8oC保存。3、若20倍浓缩洗液出现结晶,请放置37oC至溶解。4、滴加试剂时,应先摇匀,并弃去1~2滴后,垂直滴加。5、洗涤时各孔均需加满洗液,防止孔口有游离酶不能洗净。6、结果判读请在15分钟内完成。7、不同批号的试剂组份不可混用。8、试剂盒应按含有传染性材料对待。参考范围:阴性临床意义:抗-HBe阳性,并非一保护性抗体,它不能抑制HBV的增殖,多见于HBeAg转阴的病人,意味着传染性降低的一种表现。(1)如果急性乙肝发病后3-4个月,HBeAg由阳转阴,抗-HBe出现,表示预后良好。(2)有助于判断乙肝患者或HBV携带者的传染性强弱。HBeAg(+)者具有很强的传染性。抗-HBe(+)者一般传染性较低。(3)HBeAg消失前后出现抗-HBe,此时期称为血清转换期,即由HBV复制期转为非复制期。出现抗-HBe常提示HBV增殖减弱或终止。但如果HBV基因的前C区核苷酸序列改变阻止了HBeAg的形成,血循环中仍有HBV存在,肝病可能继续发展,并逐步演变成肝硬化;

(4)在出现原发性肝癌时,HBeAg检出率下降,而抗-HBe,AFP增高.故在HBsAg(+)的肝硬化病人中,抗-HBe(+),AFP增高,提示早期肝癌的可能。

见附表:“常见乙型肝炎标志物五项检测结果与临床意义”

序号

HBsAg

HBsAb

HBcAb

HBeAg

HBeAb

临床意义

1

过去和现在未感染过HBV。

2

+

(1)既往感染未能测出抗-HBs;

(2)恢复期HBsAg已消,抗-HBs尚未出现;

(3)无症状HBsAg携带着。

3

+

+

(1)既往感染过HBV;

(2)急性HBV感染恢复期;

(3)少数标本仍有传染性。①HBV感染已过;②抗HBs出现前的窗口期。

4

+

(1)注射过乙肝苗有免疫;

(2)既往感染;③假阳性

5

+

+

+

急性HBV感后康复。

6

+

+

(1)急性HBV感染;

(2)慢性HBsAg携带者;

(3)传染性弱。

7

+

+

既往感染,仍有免疫力。HBV感染,恢复期。

8

+

+

+

(1)急性HBV感染趋向恢复;

(2)慢性HBsAg携带者;

(3)传染性弱。即俗称的“小三阳”。

9

+

+

+

急性或慢性乙型肝炎感染。提示HBV复制,传染强。即俗称的“大三阳”。

10

+

(1)急性HBV感染早期,急性感染潜伏期;

(2)慢性HBV携带者,传染性弱。

11

+

+

(1)慢性HBsAg携带者易转阴;

(2)急性HBV感染趋向恢复。

12

+

+

急性HBV感染早期或慢性携带者,传染性强。

13

+

+

+

+

(1)急性HBV感染趋向恢复;

(2)慢性携带者。

14

+

+

(1)亚临床型HBV感染早期;

(2)不同亚型HBV二次感染。

15

+

+

+

(1)亚临床型HBV感染早期;

(2)不同亚型HBV二次感染。

16

+

+

-

+

亚临床型或非典型性感染。

17

+

+

+

+

亚临床型或非典型性感染。

18

+

+

+

+

亚临床型或非典型性感染早期。HBsAg免疫复合物,新的不同亚型感染。

19

+

(1)非典型性急性感染;

(2)见于抗-HBc出现之前的感染早期,HBsAg滴度低而呈阴性,或呈假阳性。

20

+

+

非典型性急性感染。

21

+

+

+

急性HBV感染中期。

22

+

+

HBV感染后已恢复。

23

+

+

非典型性或亚临床型HBV感染。

24

+

+

+

非典型性或亚临床型HBV感染。

25

+

急性HBV感染趋向恢复。

26

+

+

+

+

+

①一种亚型的HBsAg及异型的抗HBs(常见);

②血清从HBsAg转化为抗HBs的过程(少见)。

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