“俄罗斯联邦卫生部Gamaleya国家流行病学和微生物学国家研究中心、谢谢诺夫大学、俄罗斯科学院柯尔佐夫发育生物学研究所、俄罗斯科学院恩格哈特分子生物学研究所生物医学精密基因组编辑和遗传技术中心合作发表在VACCINE上的一篇文章GeneticallyModifiedMouseMesenchymalStemCellsExpressingNon-StructuralProteinsofHepatitisCVirusInduceEffectiveImmuneResponse”
该课题组第一次证明了使用表达非结构性丙型肝炎病*蛋白的修饰骨髓间充质干细胞(mMSC)作为创建有效丙型肝炎疫苗的平台的可行性。与用相同质粒的DNA免疫相比，mMSC诱导了更高的先天和适应性免疫应答。这些细胞的免疫刺激表型与高水平的白细胞介素-6(Interleukin-6，IL-6)分泌和髓源性抑制细胞比例的降低有关。
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表达丙型肝炎病*基因的间充质干细胞制备
首先他们分离出的小鼠骨髓间充质干细胞，并进行鉴定。然后将构建的丙型肝炎病*的五种非结构蛋白(NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)的pcNS3-NS5B质粒转染制备了表达丙型肝炎病*非结构蛋白小鼠间充质干细胞。转染后72h，通过免疫组化和WesternBlot对目的基因pcNS3-NS5B表达情况进行检测。接着用G-筛选15天，筛出稳定表达目的基因pcNS3-NS5B细胞系。
他们在体外比较了未修饰和修饰的间充质干细胞产生的几种细胞因子在体外，结果表明，丙型肝炎病*蛋白的表达影响三种抗炎细胞因子—干扰素-γ、白细胞介素-2和白细胞介素-6的产生。在G-（Geneticin,遗传霉素）筛选两周之后，分泌的细胞因子干扰素-γ和白细胞介素-2的浓度降低了2-3.5倍，IL-6的浓度增加了8倍。
02
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动物免疫接种及效果评价
他们将实验小鼠总共分为4组，每组10只。分别接种：HCV抗原修饰的MSCs、MSCs、HCV抗原pcNS3-NS5B质粒、对照组生理盐水。mMSC(第1组)诱导了针对质粒编码的所有病*蛋白的抗体的形成且NS3、NS4和NS5A抗体水平平均比第3组高40倍。接着他们对每一组免疫的小鼠进行脾细胞增殖实验和酶联免疫斑点法（ELSpot）实验检测IFN-γ，以评价细胞免疫情况。免疫小鼠脾细胞增殖在第1组比第3组高出2.5-6.1倍，平均高出4.2-1.6倍。第一组接种后细胞分泌IFN-γ情况也远高于其他组，其中相比第三组高30倍。表明，对经修饰的间充质干细胞的细胞免疫反应明显超过对质粒pcNS3-NS5B的反应。同时他们还检测了免疫小鼠脾细胞中骨髓来源的抑制性细胞（MDSCs），发现第一组免疫小鼠脾细胞内MDSCs含量最低。最后他们检测了免疫细胞产生IFN的活性以及免疫细胞吞噬活性。结果显示，第一组免疫小鼠脾细胞产生的IFN水平最高。而免疫细胞吞噬活性检测结果显示：第三组活性最低。对mMSC先天免疫应答的这些参数与用DNA构建体免疫应答的有效性的比较表明，在后一种情况下，免疫细胞以较低水平诱导IFN-α/β和IFN-γ。当用DNA免疫小鼠时，单核/巨噬细胞、中性粒细胞和树突状细胞的吞噬活性也降低。相反，在用骨髓间充质干细胞和骨髓间充质干细胞免疫期间，吞噬细胞的功能保持在健康完整小鼠的水平。
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