摘要
彭亮教授课题组前期通过外显子组测序发现补体2（C2）的基因多态性（SNP）与慢性乙型肝炎（CHB）密切相关，然而，截止目前，C2在CHB中的作用及其机制未明。本研究旨在初步探讨C2在CHB中的潜在作用及机制。自年1月至年1月收集在医院就诊的例CHB和30例健康对照的血清样本以及5例CHB患者和3例健康对照的肝组织样本，检测C2在CHB患者中的表达；通过检测C2在HepG2.2.15细胞和HBV感染的HepG2-NTCP细胞中的表达，观察HBV对C2表达的影响；通过构建过表达/敲低C2的HepG2.2.15细胞系，观察C2对HBV复制的影响；用IFN处理HepG2.2.15细胞以及过表达/敲低C2的HepG2.2.15细胞，观察IFN对C2表达的影响以及过表达/敲低C2对IFN抗病*效果的影响。从GEO下载GSE、GSE和GSE数据集，分析肝组织C2表达与临床指标的相关性以及C2在IFN应答以及不应答的CHB患者中的表达差异。结果发现CHB患者外周血以及肝组织C2的表达都低于健康对照，肝组织C2的表达与临床指标相关，ALT、AST、Scheuer分级和Scheuer分期越高，C2的表达越低；体外实验发现HBV可通过抑制HDAC4的表达和促进Sp1的表达来抑制HepG2.2.15细胞合成C2，而C2也可以通过抑制p38-MAPK信号通路来抑制HBV在HepG2.2.15细胞中复制，且过表达C2可以增强IFN的抗病*效果。以上结果说明HBV可能通过抑制C2的表达从而促进其在CHB患者感染的慢性化。
乙型肝炎病*（HBV）感染呈世界流行，危害严重。HBV感染可导致个体产生不同的临床结局和转归，既可表现为无症状隐匿性感染，也可表现为CHB，甚至进展为肝硬化和肝细胞癌（HCC）。宿主的遗传因素在HBV感染的发生、发展中发挥着重要的作用。针对宿主的遗传因素与HBV感染的关系，目前已发现HLA-DP、HLA-DQ、CFB等基因的单核苷酸多态性（SNP）与CHB显著相关。彭亮教授课题组的前期研究以及其他研究也发现补体2（C2）的SNP与CHB密切相关，这些研究结果说明C2可能在机体对CHB的易感性中发挥重要作用。C2是补体系统的重要组成部分，主要参与补体经典途径和甘露聚糖结合凝集素途径中C3转化酶的形成。然而截至目前，C2在CHB中的作用及其机制未明，此研究将初步探讨C2在CHB中的作用及其可能的机制。
01
C2在CHB患者肝组织和外周血中的表达
补体主要由肝细胞合成并分泌到血清中，因此研究者首先检测了C2在CHB患者肝组织中的表达。结果表明CHB患者肝组织C2的表达低于健康对照（图1A-1C）。接下来对例CHB患者和30例健康对照外周血C2的检测发现，与肝组织C2的表达结果类似，CHB患者外周血C2的表达也低于健康对照（图1D）。以上结果说明，无论是在肝组织还是外周血，C2在CHB患者的表达都低于健康对照。
图1C2在CHB患者和健康对照肝组织和外周血中的表达。
A：C2在3例健康对照和5例CHB患者肝组织中的表达（mRNA）；B-C：C2蛋白在3例健康对照和5例CHB患者肝组织中的表达（蛋白）；D：C2在30例健康对照和例CHB患者外周血中的表达。
02
CHB患者肝组织C2的表达与临床指标的关系
从GEO数据库下载GSE数据集获得例CHB患者肝组织的转录组学数据以及相应的临床资料用于分析CHB患者肝组织中C2的表达与临床指标的关系。根据临床指标ALT、AST、HBV-DNA的中位数或根据HBeAg的状态将这例CHB患者分为两组，或者根据Scheuer分级、Scheuer分期将CHB患者分为3组，比较C2在组间的表达是否存在差异。结果发现，肝组织C2的表达在不同的ALT、AST、Scheuer分级、Scheuer分期的CHB患者间的表达存在差异，ALT、AST、Scheuer分级、Scheuer分期越高，C2的表达越低（补充图1A-1B,1E-1F）；但C2在不同HBV-DNA水平和HBeAg状态的CHB患者之间的表达差异没有显著性（补充图1C-1D），以上结果说明CHB患者肝组织C2的表达与临床指标ALT、AST、Scheuer分级、Scheuer分期密切相关。
补充图1例CHB患者肝组织C2的表达与临床指标的关系。
A：C2在ALT≤60U/L的CHB患者和ALT60U/L的CHB患者间的表达；B：C2在AST≤42U/L的CHB患者和AST42U/L的CHB患者间的表达；C：C2在HBeAg阴性的CHB患者和HBeAg阳性的CHB患者间的表达；D:C2在HBV-DNA≤6（log??）IU/mL的CHB患者和HBV-DNA6（log??）IU/mL的CHB患者间的表达;E：C2在Scheuer分级为G0、G1-G2和G3-G4的CHB患者之间的表达；F：C2在Scheuer分期为S0、S1-S2和S3-S4的CHB患者之间的表达。
03
HBV感染对C2表达的影响
有研究报道HBV感染可显著抑制Huh7细胞合成C3和C4，本文结果提示C2在CHB患者肝组织和外周血中的表达低于健康对照，由此推测HBV感染会影响C2的表达。体外实验发现，C2在HepG2.2.15细胞的表达低于其在HepG2细胞中的表达（图2A-2B）。接下来，用HBV病*直接感染HepG2-NTCP细胞来模拟体内HBV感染肝细胞的过程。与C2在HepG2.2.15细胞中的结果类似，C2在HBV感染的HepG2-NTCP细胞中的表达也低于其在未感染的HepG2-NTCP细胞中的表达（图2F-2G）。以上结果表明HBV感染可以直接抑制C2表达。
图2HBV感染对C2表达的影响。
A-B：C2在HepG2细胞和HepG2.2.15细胞中的表达；C-E：HBsAg、HBeAg和HBV-DNA在HepG2-NTCP细胞和HBV感染的HepG2-NTCP细胞上清中的表达水平；F-G：C2在HepG2-NTCP细胞和HBV感染的HepG2-NTCP细胞中的表达。
04
HBV感染影响C2表达的机制
有研究发现HCV感染可以通过影响转录因子如C/EBPβ、USF-1和IRF-1等，进而抑制C3和C4的表达。鉴于HBV感染与HCV感染存在一定的相似性，推测HBV也可能通过类似的途径抑制C2的表达。为了验证这一假说，首先通过AliBaba2.1软件（